Prinsip Sintésis Asam Nukléat

Sintésis asam nukléat dilumangsungkeun maké métode trigliserida amida sialik fase padet, dimana tungtung 3′ DNA diimobilisasi dina substrat fase padet jeung nukléotida ditambahkeun dina arah 3′ nepi ka 5′ nepi ka fragmen DNA nu dipikahoyong disintésis. .Ieu béda ti sintésis DNA ku aplikasi DNA polimérase.

Tungtung 3' basa kahiji diimobilisasi dina CPG nalika sintésis, 5'-OH tina basa salajengna ditangtayungan ku di-p-tolyl trityl DMT, gugus amino dina basana ditangtayungan ku asam bénzoat sareng 3'. -OH lajeng diaktipkeun ku sanyawa amino fosfat.1 basa tina 5 5′-OH tina 1 basa jeung 3′-OH tina basa hareup ngabentuk trigliserida fosfit, nu lajeng dioksidasi ku iodin jadi trigliserida fosfat, protectant dina basa kadua 5′-OH dihapus ku nambahkeun asam dichloroacetic DM siklus ngaliwatan tambahan basa salajengna, sarta sanggeus sintésis protectant on 5′-OH dileungitkeun ku asam lemah Fragmen ieu dipegatkeun tina résin padet jeung amonium hidroksida kentel, protectant nu dikaluarkeun tina basa. kalawan amonium hidroksida kentel dina pemanasan, amonium hidroksida dipiceun, sempalan vakum garing, sarta asam nukléat dimurnikeun ku kromatografi cair atawa PAGE.

Léngkah Sintésis Oligo

Deblocking

The5 tungtung DMT ngajaga group dihapus ku nambahkeun solusi TCA.

Aktipkeun

Pergaulan aktivator jeung monomér oligonukleotida pikeun ngabentuk perantara monomér oligonukleotida aktif.

Gandeng

Gugus hidroksil 5-terminal ngaréaksikeun jeung perantara oligonukléotida aktif dina réaksi kondensasi anti-generatif pikeun ngabentuk beungkeut trigliserida fosfat anu teu stabil.

Capping 

Penambahan agén capping ngalakukeun réaksi capping asetilasi kalawan kaleuwihan gugus hidroksil nu teu kalibet dina réaksi kondensasi.

Oksidasi 

Penambahan leyuran iodin nu ngandung cai diréaksikeun jeung beungkeut fosfit nu teu stabil ku oksidasi pikeun ngabentuk beungkeut trigliserida asam fosfat stabil.

Pembelahan Sianoetil

Produk asam nukléat saatos sintésis, ditambah solusi DEA pikeun ngaleungitkeun gugus sianoétil tina beungkeut trigliserida fosfat.

Dicekel & Deprotection

Fragmén asam nukléat dipisahkeun tina pembawa fase padet ku cara nambahkeun larutan amonium hidroksida pekat terus dipanaskeun pikeun miceun gugus pelindung tina beungkeut hidrogén basa.