Prinsip dasar sintésis DNA

Sintésis DNA kimiawi dumasar kana strategi sintésis fase padet jeung kimia fosforamidit.Béda tina sintésis DNA biologis, bahan dina sintésis DNA kimiawi nyaéta DMT (4, 4-dimethoxytrityl) sareng deoxyriboxyside anu dimodifikasi fosforamidit, sapertos anu dipidangkeun dina Gambar 1. Sintésis DNA dilaksanakeun dina dukungan padet (urang tiasa nawiskeun rupa-rupaKolom Sintésis Oligo), nyaéta CPG (kaca pori dikontrol) jeung PS (polystyrene), sarta sakabeh sintésis dipigawé dinaSynthesizer DNA/RNA, nu alat utama urang, boga model béda kayaning: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 jeung sajabana, arah sintésis nyaeta ti 3 'pikeun 5', sarta nukléotida diwanohkeun ka rojongan solid via hiji. siklus sintésis.Siklus sintésis biasana ngandung opat léngkah, Deprotection, Coupling, Capping sareng Oksidasi (Gambar 2).Deprotection disetel pikeun nyabut gugus DMT dina pangrojong padet atawa gugus hidroksil 5' dina nukléosida saméméhna, asam trichloroacetic 3% dina diklorometana dipaké salaku réagen deproteksi.Saterusna fosforamidit dirobah deoxyriboxyside ieu diwenangkeun paparan gugus hidroksil kalayan bantuan aktivator, nyaéta 5-ethylthiotetrazol atawa 4, 5-dicyanoimidazole, ngabentuk phosphitetriester (III), sarta sadar hambalan Coupling.Léngkah Capping dilaksanakeun pikeun meungpeuk gugus hidroksil anu teu diréaksikeun salami léngkah gandeng, pikeun ngaminimalkeun formasi sekuen cacad anu teu dipikahoyong.Tungtungna, phosphitetriester teu stabil (III) dioksidasi jadi phosphotriester stabil kimiawi (V) kalawan iodin salaku oksidan dina hadir piridin.

DNA anu disintésis tiasa dibeulah tina dukungan padet ku aminolisis, gugus anu ditangtayungan 2-sianoetil dina phosphotriester sareng amida dina nukléobase dibeulah dina waktos anu sami, Lempeng Sintésis sareng Kolom Sintésis dina rak disimpen langsung dina kamar réaksi. tinaParabot Deproteksi.DNA atah bisa disiapkeun ku HPLC, éléktroforésis sarta OPC on demand, urang ogé bisa nyadiakeun AnjeunParabot Purifikasipikeun Post-processing.